Proteínas II

Proteínas II

Fundamentos del procedimiento

Diálisis:

En bioquímica, la diálisis es el proceso de separación de moléculas en una solución por la diferencia en sus índices de difusión o presión osmótica mediante una membrana porosa semipermeable.

Para esto, se hace uso de un aparato denominado dializador, el cual consiste en un tambor cilíndrico con una hoja de pergamino tirante en el fondo (un papel celofán en este caso). Dentro de dicho dializador se coloca la solución a separar y, a su vez, el dializador es colocado en un recipiente con agua.

A continuación, las moléculas lo suficientemente pequeñas como para pasar a través de los poros tienden a moverse hacia adentro o hacia afuera del bolso de diálisis en la dirección de la concentración mas baja. Moléculas más grandes que tienen dimensiones significativamente mayores que el diámetro del poro son retenidas dentro del dializador.

Por tanto, finalmente se separarán las moléculas de mayor tamaño de las de menor tamaño.

Ejemplo de diálisis

Ovoalbúmina:

La ovoalbúmina es la principal proteína de la clara del huevo (60-65% de las proteínas totales). Pertenece a la superfamilia proteínica de las serpinas, aunque a diferencia de la mayoría de éstas la ovoalbúmina no es capaz de inhibir cualquier peptidasa. La función biológica de la ovoalbúmina es desconocida, aunque se presume que sea una reserva de proteínas para la cria del ave. Otros autores señalan la capacidad que posee la ovoalbúmina de anular las enzimas digestivas y por esta razón señalan que es un mecanismo protector contra las bacterias exteriores agresoras al huevo.

Ovoalbúmina

Ejecución de la actividad e interpretación de los resultados

Para llevar a cabo esta actividad, se formó una solución con NaCl y ovoalbúmina y se colocó a dializar. A continuación, se tomaron muestras dentro y fuera del dializador y se buscó comprobar que, mientras las moléculas de NaCl pasaron la membrana semipermeable, las proteínas no lo hicieron.

Primero que nada, se tomó un huevo y se separó la clara (la cual contiene ovoalbúmina).

Dicha clara se colocó en agua y luego de esto se le agregó NaCl.

Después, se tomaron dos muestras de esta solución en dos tubos de ensayo. Una de ellas, fue sometida a una prueba de biuret para comprobar la existencia de proteínas en la misma. A la otra, en cambio, se le agregó AgNO3 para verificar la presencia de sal (anión cloruro específicamente). Dado que ambas pruebas dieron positivas, se puedo continuar.

Entonces la solución de agua, ovoalbúmina y NaCl se colocó a dializar en un recipiente con un papel de celofán (membrana porosa, semipermeable). Luego de esperar varios minutos, se tomaron dos muestras fuera y dos muestras dentro del dializador.

Dializador con muestra en vaso de bohemia en agua

Dentro del dializador:

Una de las muestras extraídas de dentro del dializador fue sometida a una prueba con biuret, la cual dio postiva. Por tanto, podemos asumir que dentro de este bolso de diálisis hay proteínas (ovoalbúmina).

A la otra muestra se le agregó AgNO3, obteniéndose así un precipitado blanco. Es por esto que podemos afirmar la presencia de anión cloruro en esta solución, es decir, de NaCl. De todas formas, el precipitado formado no es tan blanco como antes, lo que nos da entender que esta sal se encuentra en una proporción menor a la inicial.

Fuera del dializador:

Una de las muestras extraídas de dentro del dializador fue sometida a una prueba con biuret, la cual dio negativa. Por tanto, podemos asumir que dentro de este bolso de diálisis no hay proteínas (ovoalbúmina).

A la otra muestra se le agregó AgNO3, obteniéndose así un precipitado blanco. Es por esto que podemos afirmar la presencia de anión cloruro en esta solución, es decir, de NaCl. 

Conclusión:

Como era de esperar, al finalizar esta actividad se pudieron hallar moléculas de NaCl tanto dentro como fuera del dializador, mientras las proteínas solamente se encontraron dentro del mismo. 

Esto nos lleva a concluir que las moléculas de NaCl pudieron pasar a través del papel celofán por ser de menor tamaño que las de ovoalbúmina.

Precipitado blanco obtenido por prueba con
AgNO3 luego de diálisis. Igual dentro y
fuera del dializador.

Precipitado blanco obtenido por prueba
con AgNO3 de solución de ovoalbúmina
y NaCl (antes de diálisis).

Muestra con biuret fuera del dializador (negativa)
y dentro del dializador (positiva)